基于NHS 酯反应的试剂组与 ViaKrome 固定活性染料的对比

所有可固定活性染料染色均基于 NHS 酯活性基团与蛋白质上面一级胺的交联反应。 染色过程中，存在着水解反应平衡与交联反应平衡，当反应平衡偏向于水解，便会降低标记反应的效率。 这种水解反应与 pH，温度相关。 活性基团的半衰期在 pH8.6，4 °C 的环境下可短至 10 分钟。 这意味着，在水溶液中，染料在短时间内呈现惰性，染色效率下降。

此外，原液中的水蒸气含量会影响试剂性能，染色效率下降。当染色效率下降，便检测不到真正的死细胞。因此，试剂通常以 DMSO 复溶，储存在 -80°C，并以少量分装，供一次性使用。 染色过程需要严格计时，以便获得一致的结果。

ViaKrome可固定活性染料不基于 NHS 酯活性基团。 该类化学基团不受水解影响，在标准化测定程序中具有更好的稳定性。

2 小时和 24 小时染色后的检测结果

Jurkat 细胞和热应力（55°C10分钟）的混合物，Jurkat 细胞被染色通过 ViaKrome 可固定活性染料。 在 2 小时（n = 4）或 24 小时（n = 3）染色后立即采集样本。 记录死细胞群（占时间零的百分比）。 错误条表示跨复制的平均变异。 在 2 小时后染色的样本采集比率为 98-100%（时间为 0 时），24小时后染色的样本采集比率为 91-103%。