杂交瘤抗体工程

杂交瘤细胞系为定制式单克隆抗体（mAb）的设计提供了一种久经考验的方法。杂交瘤细胞系的开发始于1975年1，是骨髓瘤细胞和B细胞融合而成的细胞。虽然杂交瘤细胞系构建工作流已久经验证，但却存在耗时长且涉及许多繁杂的人工操作步骤等挑战。为构建杂交瘤细胞系，需从免疫动物中分离出B细胞，并将B细胞与骨髓瘤细胞融合，以评估新杂交瘤细胞系的抗体质量和生产效率。杂交瘤细胞系用于抗体工程，本身存在开发劳动强度大、时间长等诸多挑战。但，庆幸的是，研究人员目前可通过仪器自动化和集成解决方案，有效简化杂交瘤工作流的各种繁杂人工步骤。

hybridoma antibody engineering workflow overview with product call-outs 

B 细胞分离

难点：分离大量B细胞的同时，保持细胞活率

构建杂交瘤细胞系的理想起点是拥有大量高质量的B细胞。为供体动物（通常使用小鼠）注射抗原产生免疫反应。取免疫动物血样，检测适当的抗体。如果血样免疫反应结果呈阳性，取出小鼠脾脏，通过密度离心法或流式细胞术提取B细胞。B细胞不能永生，也无法耐受培养，必须直接使用或冷冻保存。

细胞融合和筛选

难点：高效构建和培养杂交瘤细胞系

B细胞和永生骨髓瘤细胞必须融合才能构建杂交瘤细胞系。B细胞和骨髓瘤细胞在含有聚乙二醇的培养基中共培养或进行电融合，诱导细胞融合并产生杂交瘤细胞系。融合后，将细胞放在hypoxanthine-aminopterin-thymidine (HAT) 培养基中孵育。只有成功融合的杂交瘤才得以存活。

靶标选择和亚克隆

难点：改进细胞系和验证抗体产生

杂交瘤融合后必须对其进行检测，以确保它们产生抗原特异性单克隆抗体。培养单个杂交瘤细胞，使其产生抗体，用ELISA（酶联免疫吸附测定法）或其他方法进行筛选。随着这些单细胞系的生长，对其进行连续稀释，筛选生长最快和最高产量的细胞系。同时培养大量新杂交瘤细胞系需经过多次繁杂的手动操作以及严格的数据管理。因此，贝克曼库尔特为您提供支持细胞培养和细胞系维持的同时，集成数据采集功能的自动化解决方案2.

小结

  • 杂交瘤细胞系构建为mAb生产提供一种经济实惠且久经验证的方法。
  • B细胞必须从免疫动物脾脏中分离，且不耐受培养。依托自动化解决方案，可加快提取过程，从而迅速获得备用的B细胞2.
  • 永生骨髓瘤细胞和B细胞融合形成杂交瘤细胞系。细胞融合和融合后选择自动化解决方案，可减少手动操作，大幅提升工作效率.
  • 培养杂交瘤细胞系并监测其质量和mAb表达稳健情况。许多细胞系需连续培养。我们提供培养和数据采集的集成解决方案，可根据您的实际需求灵活按需定制2.

参考文献

  1. Kohler, G. & Milstein, C. 1975. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 256, 495-497.
  2. AAG-345101.18

 

产品和方法仅用于科研，不用于临床诊断。

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