使用密度梯度超离优化LNPs制备及表征流程
Shawn Sternisha, PhD
Global Commercial Product Manager
脂质体纳米颗粒（LNPs）已成为治疗领域的重要工具，尤其在某些COVID疫苗中，它们有效地传递了治疗性药物，如mRNA。然而，LNP配方常常表现出显著的异质性，这可能导致免疫原性增强、稳定性下降和生产成本增加。评估LNP配方的异质性具有挑战，因为在溶液内存在生物物理和功能参数的变化。值得注意的是，密度梯度超速离心（DGUC）是一种有效的分离LNP的方法，使得更深入的分析成为可能。Patel等人的研究使用DGUC评估了LNP的异质性，提供了对这些纳米颗粒组成和特性的宝贵见解。1
DGUC在LNP表征中的优势
在LNP工作流程中实施DGUC
Patel等人采用了速率区带超离（DGUC）技术，将他们的LNP样品分割成不同的亚群体。这种分离方法包括在连续的蔗糖梯度（搭配反向NaCl梯度，以保持渗透压）上铺设少量样品。随着样品受到离心力作用，其粒子根据沉降系数以不同速度向试管底部迁移。在速率区带分离中，水平转头由于其较长的离心路径而具有更好的分辨率。离心结束后，将样本回收为六个组分，并评估每个组分的功能属性。
DGUC揭示了多种LNP配方的异质性
Patel等人制备了两种LNP配方，其组成分别为1%或2%的 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-methoxypolyethylene glycol （PEG-DMG）。通过调节T-混合比，他们能够生成一对具有近似平均直径（分别为101和98nm）和相对效力（分别为234%和274%）（空心符）的样品。利用DGUC，他们将这些样品纯化为六个不同的组分，然后使用DLS和转染测试分别确定每个组分的水合直径和效价。DGUC揭示了这两种LNP配方在水合直径和效价方面的高度异质性（闭符号）。
总结
尽管每种LNP制备的平均直径和转染效率几乎相同，但在使用速率区带DGUC分离后观察到高度异质性。所以，准确识别LNP配方组成对于确保患者安全有着重大意义。DGUC代表了一种既适用于制备，也适用于分析的样品纯化最佳方法。要了解如何通过超速离心优化您的LNP研究及生产流程，请访问 beckman.com/centrifuges/ultracentrifuges.
参考文献-
Patel, et al. DOI: 10.3390/vaccines11071224, Vaccines© 2023, https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/, imageswere not altered.
