淘洗离心法
淘洗是一种根据粒径和密度分离颗粒的离心技术,所用转头为淘洗转头。
淘洗转头根据粒径(直径约 2-50µm)分离和/或浓缩单一分散度的细胞或颗粒悬浮液。淘洗转头结合两种分离技术,同时有两种反向力作用于转头腔室中的每个细胞上:
- 离心力:推离细胞远离旋转轴心。这是一种在离心力作用下的沉降过程。
- 流体力:将其推向旋转轴心 ——“反向流动淘洗”。这是一种通过洗脱方式进行的分离过程。
分离发生在漏斗状淘洗腔室内。当转头在离心机中旋转时,细胞悬浮液以预设流速从离心机外部泵入转头然后进入淘洗腔室的狭窄末端。随着悬浮细胞导入腔室,这些细胞将根据其沉降速率的不同而移动并停留在相应的梯度位置,在该处离心力和流体力在细胞上达到平衡状态。
低沉降速度的小细胞被快速推向旋转轴心而被洗出。这些被洗出腔室之外的细胞,沿着转头内部管路流动,然后离开转头进入收集容器。颗粒较大或密度较大的细胞向舱室移动的速度较慢,并且在淘洗边界达成平衡。颗粒最大或密度最大的细胞则停留在腔室的入口处附近,此处离心力和流体力都很高。通过逐步增加流速,可将大小或密度递增的细胞组分依次洗出转头之外并被收集。持续增大流速,最终可将所有细胞从腔室内洗出。