颗粒分离
离心力可用于分离溶液中的颗粒。通过使用离心机,我们可以加快样品的沉降过程。在离心过程中,每个细胞都会被离心力推离旋转中心,该作用力比细胞自身重力要大很多倍。
沉降分离法
如何利用离心力从混合物(比如血液)中分离出目的颗粒?
血液由血浆(水和其他多种化合物的溶液)以及几种悬浮细胞(即红细胞、白细胞和血小板)组成。对于生物颗粒而言,这些细胞巨大无比,事实上,如果将抗凝后的血液放在 1g 的自然重力环境中静置一夜,其中含有的悬浮细胞就会从血浆中缓慢沉淀下来。如果通过离心机产生的 1500 x g 相对离心力(RCF),则可在 10 分钟左右即可完成该分离过程,大大加快了沉降速度
为什么离心力能使沉降速度加快? 那是因为,离心过程中,使每个细胞远离旋转中心的离心力比该细胞自身所受重力大很多倍 —— 例如在上述血液细胞分离案例中大了有1500 倍。
比如血小板就可以在沉降过程中与红细胞和白细胞分离开来,因为相比其他两种细胞,它要小得多。我们要做的就是选择合适的相对离心力和离心时间。如将血样在 2900 x g 下只离心 3 分钟,血小板来不及与较重的细胞一起向下沉淀,我们便可在顶层富含血小板的血浆中收集该细胞。
刚才描述的过程是在离心管或其他容器底部产生沉淀或颗粒沉积物。沉淀上方液体称为上清液。如图 1 所示,可从上清液中收集纯度很高的最小颗粒组分。但是由于部分小颗粒在离心分离开始时靠近离心管底部,所以沉淀中或较大颗粒中始终会包含一些比较小的颗粒,。通过在不同速度和时间条件下进行多阶段的离心分离,可以从混合物中分离、收集不同粒径的颗粒。这种方法称为差速离心法。
密度是颗粒或细胞的另一个物理性质,可以利用密度差异实现样品分离的目的。通过施加离心力,可使密度存在细微差异的颗粒相互分离。只需调整密度梯度液的密度范围,使得密度较小的颗粒悬浮,而密度较大的颗粒下沉。
密度分离法
颗粒或细胞还有其他的物理性质,也可以利用它来实现离心分离的目的,这个独特的物理性质就是:密度。想象一下,一个苹果和一个岩石,大小形状完全一样。岩石远比苹果坚实,因此岩石沉入水底,而苹果则浮于水面。岩石的单位体积质量更大,简单说,它的密度更大。密度通常表示为克每毫升(g/mL);水的密度为 1g/mL。通过离心力,可以将密度存在微小差异的颗粒相互分离。只需调整密度梯度液的密度在合适的范围,便可使密度较小的颗粒悬浮,而密度较大的颗粒下沉。
这种方法常用来分离淋巴细胞,这是一种白细胞,它们的粒径与许多其他血细胞很相似,普通沉降法无法将其分离出来。但是,它们的密度却比其他细胞小。如果将血样添加至密度为 1.077g/mL 的密度梯度液上方,然后进行离心处理,淋巴细胞将形成一层悬浮区带,与其他大部分密度大于 1.077g/mL 的白细胞和红细胞充分分离,这些密度较大的细胞会沉降至离心管底部。血浆和血小板密度最小,如右图所示上浮于离心管顶部。
右下图为淋巴细胞的密度分离示例。分别呈现离心前后的样品分布情况。