脂类
作为一个或多个基本生物学过程的必需物质,脂类与蛋白质、碳水化合物和核酸统称为生物大分子。在生物学系统中,脂类可以储存能量、充当结构成分(如细胞膜的磷脂双分子层)或参与细胞内和细胞间的信号传导。
与其他生物分子一样,脂类可分为不同结构、化学行为和功能各异的分子:
- 甘油单酯
- 甘油二酯
- 甘油三酯(脂肪和油)
- 脂肪酸
- 蜡
- 甾醇
- 脂溶性维生素(如维生素A、D、E、K)
- 磷脂
请注意,“脂肪”和“油”是同类型甘油三酯的非技术术语,仅在室温下存在物理状态差异:脂肪为固体,油为液体。
脂类的纯化和分析
在高度异质性的样品材料中,脂类常与多糖(糖脂)、蛋白质(脂蛋白)等其他生物分子形成复合物。通过加酸水解,如添加较高浓度盐酸后延长加热时间,脂类即可从复合物中游离出来。
目前已开发出多种基于有机溶剂萃取的脂类纯化方法,以及数种非溶剂萃取方法。在溶剂萃取方法中,溶剂的选择取决于被分离脂质的电荷性质:
- 极性脂类(如磷脂)最易溶于醇类和其它极性溶剂
- 非极性脂类(如三酰甘油)最易溶于非极性溶剂,如己烷和戊烷
非溶剂液体萃取方法通常涉及硫酸处理,或在需要避免腐蚀性酸的情况下使用化学表面活性剂进行处理
进一步分离纯化后脂质的分解产物及其他分析操作,可用的仪器和/或化学方法及技术包括:
- 薄层色谱(TLC)
- 气相色谱(GC)
- 质谱(MS)
- 核磁共振(NMR)
- 碘值测定法(测定脂质吸收碘的克数)
- 皂化值法(定量测定将脂质分解成甘油和脂肪酸成分所需的KOH)
新的脂质纯化方法在细胞外囊泡(EV)新兴研究领域起着极其重要的作用。与其来源细胞类似,参与胞间通讯的EV本身也包裹着磷脂双分子层或单分子层。
在某些情况下,利用沉淀和超速离心法提纯EV的传统研究方案已被基于亲和性的方法取替。如,外泌体和微囊泡等EV在其表面表达磷脂酰丝氨酸,使磷脂酰丝氨酸与Tim4蛋白特异性结合,实现此类EV的选择性分离,所获EV的纯度明显高于传统方法。