随着人们对细胞外囊泡（EV）在生理过程和疾病发生发展中的作用机制及应用前景的广泛研究，二十一世纪初，该领域研究迎来重大转折点。科学家们开始从蛋白质组学、脂质组学、基因组学、生物化学等多个角度研究 EV 的内含物。这些研究揭示了 EV 在不同情况下的潜在作用。 Chaput（2003）和 Zitvogel（2005）以免疫细胞为对象的研究结果，令癌症免疫疗法领域的研究人员深受启发。Ratajczak（2006）证明细胞源性微囊泡可通过 mRNA和蛋白质水平的转运对其他细胞进行重新编程。这一突破性发现突显了 EV 可能对细胞行为产生的重大影响。 当前，已有证据表明，EV 在免疫应答调节方面具有多种重要作用。（图 1.另请参阅 Buzas，Nature Reviews Immunology，第 23 卷，第 236-250 页（2023 年）。

图 1: EV 的调控功能。位于中央的 EV 在其表面表达特异性标志物， 并与 T 细胞、自然杀伤细胞（NK）和树突细胞（DC）等各种免疫细胞相互作用。调节性 T 细胞（Treg）、细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）、 三磷酸腺苷（ATP）和单磷酸腺苷（AMP）均参与这些相互作用。 请注意，为方便观察，图中所示细胞外囊泡被放大处理。

目前，科学界中有部分科学家使用“外泌体”一词，而最初这些结构被称为“微粒”。这种命名上的差异容易令人混淆，特别是基于粒径特征任意划分囊泡类型的做法，令这一问题更为突出。为解决这一乱象，某些人士建议采用“细胞外囊泡（EV）一词作为各种由脂质双分子层构成、不能自我复制颗粒的总称。2011年，国际细胞外囊泡学会（ISEV）成立，极大推动了业界对这一术语达成全面共识。在《细胞外囊泡研究基础信息指南（MISEV）》（2018）中，正式确定细胞外囊泡（EV）的定义，即由脂质双分子层构成、不能自我复制的颗粒。学会官方期刊《细胞外囊泡杂志》进一步推动了业界对这一术语的认可，为该领域研究提供了交换数据、想法和信息的平台。

选择哪种细胞外囊泡（EV）分离和富集方法一直是 EV 领域争论的主要话题。可用技术有多种，包括超速离心法（ultracentrifugation，UC）、超滤法（ultrafiltration）、尺寸排阻色谱（size exclusion chromatography，SEC）、沉淀法（polymer precipitation）、免疫亲和层析（immunoaffinity chromatography）、免疫磁珠捕获（magneto-immunocapture）、微流控免疫芯片（microfluidic immunochips,）和脂质纳米探针（lipid nanoprobes）。选择何种方法主要取决于具体研究目标。

在 EV 表征方面，已开发出多种生物物理方法，如纳米颗粒跟踪分析和脉冲传感技术，均可用于 EV 计数和粒径测定。进一步表征涉及蛋白质组学、基因组学、脂质组学等方法。这些方法均可提供整个 EV 群体的表征信息，而流式细胞术支持对单个 EV 进行表征。单个EV 颗粒的表征信息在揭示不同 EV 的异质性方面具由极高价值。然而，确保研究结果的准确性和可重复性同样至关重要。因此，学术界各位同仁于 2011 年共聚一堂，成立国际细胞外囊泡学会 (www.isev.org), 对推进全球 EV 研究发挥了关键作用。

2018年，该学会发布 EV 分析最新指南《细胞外囊泡研究基础信息指南》（MISEV），旨在解决业内 EV 研究面临的争议和难题。Ramirez 等人表示，“持续关注流式细胞术的原因是它能够可靠区分携带和未携带特定蛋白标志物的 EV，从而准确测定特定类型 EV 的占比”。对样本内 EV 异质性的定量和定性分析，是获取全面信息的关键所在。为了优化这一过程，近期我们还提供了有关使用流式细胞术进行 EV 研究的新资源（Welsh JA、Arkesteijn GJA、Bremer M 等人。单细胞外囊泡流式细胞术汇编。J Extracell Vesicles. 2023;12(2):e12299. doi:10.1002/jev2.12299)。

细胞外囊泡（EV）研究已发展成为一个独立研究领域，已成立专门学会，且定期召开学术会议。EV 的发现向科学界打开了一扇通往未知领域的大门，它在各种生理过程调控中发挥至关重要的作用。进一步开展该领域的研究，有望揭示EV的 异质性，阐明其各种功能，还可能有助于发现新的疾病标志物。通过监测细胞特异性 EV，研究人员可寻找 EV 表面或内部特定标志物。这种方法仅需一次抽血即可实现疾病的监控，已在阿尔茨海默症检测中得到验证。(Tao-Ran (2019)。

此外， EV 可以作为递送载体将治疗用化合物输送至靶细胞或器官的特性，目前正受到研究人员的广泛追捧。研究人员希望通过改造出可靶向特定细胞（比如肿瘤）的载药 EV，攻克传统疗法存在的局限性。这种有针对性的药物递送方法或可提高疗效，尽可能减少不必要的副作用。这一点至为重要，因为目前的疗法通常采用全身给药的方式，不仅疗效欠佳，还可能损害人体健康组织。

参考文献

• Asleh et al. Extracellular vesicle-based liquid biopsy biomarkers and their application in precision immuno-oncology. Biomark Res 11, 99, 2023.
• Ramirez et al. Technical challenges of working with extracellular vesicles. Nanoscale 10, 881-906, 2018.
• Théry et al. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. J. Extracell Vesicles. 7(1):1535750, 2018.
• Couch et al. A brief history of nearly EV-erything – The rise and rise of extracellular vesicles. J. Extracell Vesicles. 10(14):e12144, 2021.
• Tao-Ran et al. Extracellular vesicles as an emerging tool for the early detection of Alzheimer’s disease. Mech Aging and Dev. 184:111175, 2019.
• Welsh JA, Arkesteijn GJA, Bremer M, et al. A compendium of single extracellular vesicle flow cytometry. J Extracell Vesicles. 2023;12(2):e12299. doi:10.1002/jev2.12299.

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