纯化病毒载体时,应选择离心法还是亲和色谱法?

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spINSIGHT Ultracentrifugation is preferred for high purity EV isolation Shawn Sternisha

细胞外囊泡(EV),尤其是外泌体,作为一种生物标志物和治疗药物,已显示出巨大的应用前景。然而,许多现有EV纯化技术在应用中会产生大量的囊泡,无法进行后续的表征和应用。

超速离心法(UC)可分离EV特定亚群且实验结果重现性好,因此被广泛认为是EV纯化的金标准。1


 

利用UC纯化EV

超速离心法(UC)的卓越可靠性

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EVs 在大小、组成和功能方面具有异质性。这种差异使得EV研究面临严峻挑战,因为准确分析EV群体的物理和功能特征需选择可靠的纯化技术。而UC具备多种功能和性能优势,成为EV纯化最常用的技术。2

 


 

 

差速超速离心法(DUC)简化纯化过程

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差速超速离心法(DUC)简单而高效,依靠多轮离心选择性清除污染物并获得高质量EV沉淀物。3DUC的主要优点是手动操作时间短、通量高、产率高、平均样本成本低。此外,DUC广泛适用于从小样本量到升级别的大批量样品的EV纯化流程。

 


使用密度梯度液获得更高纯度

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通常使用蔗糖和碘克沙醇等密度梯度液来获得高纯度EV样品。在密度梯度超速离心法(DCUC)中,EV缓慢沉淀至密度梯度液“垫层”上,4密度梯度超速离心法(DGUC)使用密度渐变的材料介质,根据EV亚群浮力密度将其分离。5 如果EV纯度为优先考虑事项,那么基于密度的分离方法不可或缺。


 

小结

超速离心法具有独特优势,是目前应用最广泛的EV纯化方法。此外,UC作为一种超速离心法平台,广泛适用于各种EV应用。点击此处了解超速离心法如何改善EV纯化流程的更多信息。

参考文献
  1. Saenz-Cuesta, et al. (2015). Front Immunol, 6, 50. DOI: 10.3389/fimmu.2015.00050

  2. Konoshenko, et al. (2018). Biomed Res Int, 8545347. DOI: 10.1155/2018/8545347

  3. Sharma, et al. (2020). Sci Rep, 10, 13327. DOI: 10.1038/s41598-020-70245-1

  4. Duong et al. (2019). PLoS One, 15, e0215324. DOI: 10.1371/journal.pone.0236914

  5. Van de Vlekkert et al. (2020). 10, e3576 DOI: 10.21769/BioProtoc.3576

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