将 CytoFLEX S 流式细胞仪上设计的面板迁移至 CytoFLEX SRTl流式分选仪

介绍

设计可靠的流式细胞术抗体染色方案通常需要大量的思考和努力来平衡检测灵敏度、最大限度地减少光谱重叠以及针对目标标记物的荧光抗体的可用性。 由于更容易访问并且希望使用流式分选仪进行需要分选的实验，因此通常需要在流式细胞术分析仪上执行分选实验的初始设计工作。

将多色免疫分型实验从流式分析仪转移到流式分选仪确实会带来一些繁琐的步骤。 通常，流式分析仪和分选仪使用不同的软件，并且需要重复复杂的门控策略等实验细节，从而花费额外的时间并引入人为错误的可能性。

CytoFLEX SRT 使用 CytExpert SRT 软件（跨整个平台使用的 CytExpert 的衍生软件）进行设置和分析。 该软件匹配以及与 CytoFLEX S 和 CytoFLEX SRT 仪器参数匹配的潜力允许用户在 CytoFLEX S 流式细胞仪上进行设计和分析工作，并以最少的手动步骤将该实验导入到分选机中。

在本应用说明中，在 CytoFLEX S 流式细胞仪中创建的实验将导入到参数匹配的 CytoFLEX SRT 细胞分选仪中。 检查增益和补偿设置后，在分析仪中创建的相同区域将用作多色分选实验中的分选区域。

参数匹配的探测器配置

CytoFLEX SRT 细胞分选仪的检测器配置是 CytoFLEX S V–B–Y–R 流式细胞仪的扩展。 CytoFLEX SRT 包含两个附加通道，一个来自黄绿色激光，另一个来自紫激光。 拥有这两种仪器使大批量实验室能够在分选机上执行之前使用分析仪设计分选门控策略。

图 1. 荧光检测器的比较。 比较了 CytoFLEX SRT（顶行）和 CytoFLEX S V-B-Y-R 流式细胞仪（底行）的检测器通道。 CytoFLEX SRT 包含两个附加通道，一个来自黄绿色激光，一个来自紫激光

CytExpert 模板可以移植到 CytoFLEX SRT，以节省仪器设置时间。

从CytExpert 软件导出 .xit 文件

在此示例中，根据使用说明，使用 DURAClone IM T 细胞子集试剂盒生成来自 CytoFLEX S 流式细胞仪的数据。 对于初始设置和分析，使用的样品是 ClearLLab 测定的异常细胞对照。 这允许对已知特性的样本进行多次试验。

遵循使用说明中的门控和分析建议，可以在统一的 DURAClone 干抗体组中分析具有不同水平标记表达的多种细胞类型。

如果未安装电子记录管理，请导航至存储实验的文件夹。 默认情况下，这是 C:\Users\xxxxxxxx\Documents\CytExpert Data\.

找到.xit（CytoFLEX 实验文件）及其存储 .fcs 文件的关联文件夹。

图 2. 所需的文件夹结构。CytExpert 希望 fcs 文件存储在与 xit 文件同名的文件夹中。

重要信息：.xit 文件和文件夹必须位于同一文件夹中才能成功完成转换。

如果不需要传输 .fcs 文件，请保存实验副本并从副本中删除管文件。

将此文件移动到便携式驱动器或您想要的任何方式传输文件。 将文件保存在 CytoFLEX SRT 工作站的硬盘上。

如果安装了电子记录管理 (ERM)，则 .xit 文件及其关联文件夹的名称是乱序的。 要保留信息，请使用实验资源管理器中的导出实验选项导出所需的 .xit 文件和文件夹。

重要提示：要成功导出文件，不得打开实验。 如果您要导出的实验已打开，请从文件菜单中选择“关闭实验”。

在 CytExpert SRT 软件中将 .xit 文件转换为 .xits 实验

打开 CytExpert SRT 软件。 从文件菜单中选择转换 CytExpert 实验。 使用顶部的“浏览”按钮找到您想要转换的 .xit 文件。 使用底部的“浏览”按钮导航到您想要存储.xits 文件的位置。默认情况下，这些存储在C:\Users\xxxxxxxx\Documents\CytExpert Data\

图 3. 转换 CytExpert 实验。将 CytExpert 文件转换为 CytExpert SRT 文件所需的一系列菜单。

下图显示了转换前后的相同实验。

图 4. CytExpert 中显示的数据。数据是在 CytoFLEX S V-B-Y-R 仪器上采集的。 创建了图、门、区域和统计数据并将其应用于四个样本。

图 5. CytExpert SRT 中显示的转换数据。 图 5 所示的文件已转换为 CytExpert SRT 文件。 所有绘图、门、区域和统计表均已转换并显示在界面中。 Tube 工作区显示原始文件中的所有样本都已被移植。

尽管 CytoFLEX SRT 细胞分选仪和 CytoFLEX 分析仪平台非常相似，但可能需要改变增益和/或补偿才能将细胞群置于绘图上的所需位置。 CytoFLEX 平台上提供的标准化工作流程可用于调整增益，以将参考材料荧光放置在两台仪器上的同一位置。 为了获得最佳补偿性能，建议在 CytoFLEX SRT 上运行补偿控制并将其应用于转换后的实验。

利用 CytoFLEX 平台的补偿库功能，这些补偿控制可以随时运行并存储。 然后可以根据转换和标准化后应用的新收益来转换补偿。

有关 CytoFLEX 平台仪器标准化的更多详细信息，请参阅 CytoFLEX 平台或 CytoFLEX SRT 细胞分选仪的使用说明。

成功秘诀

• 确保参数匹配最简单的体验。 匹配意味着用于激发和通道名称的激光线相同。 不匹配的通道将被消隐，并且需要重新绘制区域。
• CytoFLEX S V–B–Y–R 流式细胞仪具有与 CytoFLEX SRT 相同的 4 个激光器，并且具有最大的实验转换潜力。

概括

CytoFLEX S V-B-Y-R 流式细胞仪和 CytoFLEX SRT 细胞分选仪具有类似的荧光检测器配置。 这使得使用分析仪设计面板和优化实验条件变得更加容易。 事实上，分类器软件 CytExpert SRT 包含允许导入 CytExpert 文件的功能。 当操作员准备好根据优化的条件进行细胞分选时，这可以节省他们的时间和精力。

使用 CytoFLEX S V-B-Y-R 流式细胞仪上建立的图、门和区域采集数据时，有必要评估仪器设置。 可能需要更改增益设置或补偿矩阵。 使用平台中的标准化工具可以帮助调整数据显示。 一旦应用了补偿，剩下的就是选择感兴趣的群体以及应用分选逻辑和停止条件。

仅供研究使用。 不用于诊断过程。