Astrios和CytoFLEX SRT流式分选仪的孔板分选速度比较

目标

• 比较 CytoFLEX SRT 和 MoFlo Astrios 细胞分选仪的孔板分选速度
• 了解哪些因素会影响孔板分选速度和准确性

细胞分选仪最有用的功能之一是能够将细胞放入各种 ANSI/SLAS 板配置中。6 孔、12 孔或密集的 384 孔板通常用于细胞系发现和开发、有限稀释测定或单细胞克隆或基因组学等应用。

分选操作员经常会问到孔板分选速度有多快，或者哪种分选仪（如果有不同选项）是板输出实验的最佳选择。

贝克曼库尔特生命科学提供两种细胞分选仪：MoFlo Astrios，一种大型、高参数（最多 44 个荧光参数）细胞分选仪，以及 CytoFLEX SRT，一种主流分选流式细胞仪（最多 15 个荧光参数）。选择一个平台而不是另一个平台有几个原因，包括参数数量、激光调色板和安装所需的空间。 Astrios 和 CytoFLEX SRT 均可将细胞精确地沉积到板中，密度高达 384 个孔。它们还可以使用垂直向下、垂直分选法分离目标细胞，以辅助静态相互作用，或分选到深孔格式中。

鉴于 MoFlo Astrios 和 CytoFLEX SRT 之间的板输出相似性，本技术说明提供了有关孔板分选速度的信息，供在选择细胞分选仪时用于决策过程。

使用的材料

• Spherotech Rainbow 珠 RCP-30-5A
• 稀释剂
• CytoFLEX SRT细胞分选仪
• MoFlo Astrios细胞分选仪
• 96孔板

分类设置

我们努力消除对目标粒子丰度以及尖端尺寸和压力差异的担忧。鉴于 MoFlo Astrios 的手动设置和控制以及 CytoFLEX SRT 的自动设置，这无法完全消除。表 1 包含这些实验中使用的每种仪器的液滴创建参数。

表 1. 液滴条件

很容易观察到许多液滴生成参数不匹配。值得注意的是，发生的原因以及这对实验设计意味着什么。

驱动液滴形成的晶体振动频率告诉操作员每秒形成多少液滴。此信息可用于指导以高纯度和低中止的速度将事件彼此分类。一般来说，随着事件率接近液滴率，中止会增加，这意味着目标细胞将被浪费。这不是本次调查关注的问题，因为目标粒子不会成为限制因素。在这种情况下，由于正在处理的目标事件丰富，目标损失将由板移动到下一个目标孔所需的时间驱动。

通过喷嘴产生液滴所需的压力主要由喷嘴直径决定。喷嘴越大，压力越低，反之亦然。在一定压力范围内，给定的喷嘴会产生稳定的液滴，所用的压力也会影响产生稳定液滴的频率。CytoFLEX SRT 的设定压力无法修改，因此根据 IFU 中的建议，对 MoFlo Astrios 使用标准设置。由于压力主要影响液滴频率，因此这不是孔板分选所关心的问题。

振幅是晶体必须振动多大才能产生稳定液滴。由于此参数在分类过程中经常发生变化以保持液滴形成稳定，因此没有尝试在两个系统之间匹配这些参数。

最后，实验的原理是确定更小、更紧凑的细胞分选仪是否能像更大、参数更丰富的细胞分选仪一样快速孔板分选。

分类设置图 1。顶行，MoFlo Astrios 上 Summit 软件中的分类区域。底行，在 CytoFLEX SRT 上的 CytExpert SRT 软件中对区域进行分选。每个细胞分选器都设置为避免碎片并对 8 峰珠混合物中最亮的峰进行分选。

每个分选仪都设置为对 8 峰珠组中最亮的峰进行分选。还尝试匹配每个分选仪的每秒事件采样率，同时记住检测差异和灵敏度差异可能意味着这些样本的运行速率略有不同。每个分选仪都设置为单一分选模式，分选包络为 1。

结果

表 2 总结了每台仪器上孔板分选所需的时间。在这种情况下，重复 5 个板，CytoFLEX SRT 实际上平均每个板快 13-14 秒。

表2.

成功秘诀

• 将稀有细胞分选到板中时，每个事件都很重要。仔细考虑需要多快孔板分选以及由于中止或板移动而可能错过多少稀有事件。
• 在分选到 96 深孔板或 384 孔板时，建议使用垂直向下分选以降低撞击孔内侧壁或静态相互作用导致液滴到达错误位置的可能性。
• 在克隆细胞或需要严格单细胞沉积的其他应用时，建议使用单一分选模式以确保仅对一个目标事件进行分选。

总结

本技术说明中的数据显示，当参数可用性不是限制因素时，CytoFLEX SRT 细胞分选仪可以像类似设置的全尺寸细胞分选仪一样快或更快地孔板分选。这为更多实验室环境打开了板分选的大门，并扩大了这项强大技术的使用范围。

仅供研究使用。不可用于诊断。