分析型超速离心概述
分析型超速离心(AUC)用于溶液中大分子表征
分析型超速离心(AUC) 是可用于确定蛋白质或其他大分子的分子量、流体动力学和热力学特性的最通用、最严格、最精确的技术。
虽然它的历史可以追溯到近一个世纪,但 AUC 是:
- 在不需要标准的无基质环境中执行的独立、第一原则技术。
- 在提供相同范围的信息方面是其他技术所无法超越的,拥有可比拟的精确度和准确性。
- 是溶液中蛋白质分子量测定的黄金标准方法2。
AUC 101:基于速度和平衡提供洞见
与用于分析大分子的其他方法不同,分析型超速离心(AUC)能够在生物相关溶液条件下对样品在天然状态下进行表征。AUC 可用于研究几乎任何类型的分子或颗粒,其所接受的浓度范围广泛,溶剂种类多样。对于许多研究问题,目前不存在其它理想的分析方法代替 AUC。1
AUC 为研究人员提供了两种互补的实验方法。沉降速率提供有关分子大小和形状的第一原理流体动力学信息。沉降平衡提供有关溶液摩尔质量、化学计量比、结合解离常数和溶液非理想性的相同类型信息。
更多问题?更多答案。
在一个实验中,AUC 技术可以为重要问题提供比任何其他同类技术更多的答案:
- 形状:我的蛋白质是什么样的形状?
- 直径:我的颗粒大小是多少?
- 质量:我的蛋白质或溶液中的复合物的分子量是多少?
- 化学测量:有多少亚基构成我的蛋白质?
- 纯度:我的样品中还有其他颗粒吗?
- 制剂:我的蛋白质在这个缓冲液中性质怎么样?
- 异质性:我的蛋白质是否与其他分子结合,复合物的构成是什么?
- 聚合:我的蛋白质仍然处于可用的状态吗?我应该期望我的药物配方有免疫反应吗?
- 结合:我的蛋白质是否与其他蛋白质结合或游离?
- 构象:我的蛋白质与配体结合后,其构象会改变吗?
请在我们的分析型超速离心简介手册中了解有关 AUC 的更多内容。
参考文献
1 Cole JL, Lary JW, Moody T, et al. Analytical Ultracentrifugation: Sedimentation Velocity and Sedimentation Equilibrium. Methods Cell Biol 2008;84:143–79.
2 Berkowitz S, Philo J. Characterizing Biopharmaceuticals using Analytical Ultracentrifugation. In: Houde D, Berkowitz S, editors. Biophysical Characterization of Proteins in Developing Biopharmaceuticals. Amsterdam: Elsevier; 2015. p. 211-260.
何为分析型超速离心机?
分析型超速离心机与高速预置离心机类似,只不过被旋转的样本中的颗粒通过一个完整的光学检测系统监控。这些光学系统(UV-Vis 吸光和瑞利干涉)能够准确观察分子在进行沉淀时的解决方案行为。使用先进的软件,数据可用于对所研究样品中的分子进行全面分析。