初步筛选

初步筛选的目标是确定最初“苗头化合物”—— 通常为抗体,以作为先导化合物优化的起点。初步筛选一般依赖于直接测量抗体-抗原结合试验,比如 96 孔或 384 孔高通量酶联免疫吸附测定试验(ELISA)。在典型的 ELISA 试验中,吸附在酶标板上的药物靶标与一级抗体或抗体表达细胞(潜在苗头化合物)结合,随后检测结合抗体。自动ELISA检测速度快、灵敏度高,已成为常规初步筛选试验的常用研究方法。

基于荧光激发细胞分选术(FACS)的流式细胞术是另一种常用的初步筛选方法。研究人员可通过 FACS 快速将不同种类的细胞混合物分选至特定细胞群。

样品制备一般工作流包括:

  • 细胞制备
  • 添加一抗
  • 添加二抗
  • 多次离心、清洗步骤

样品制备自动化在提高通量的同时,也使FACS 操作前的耗时大幅减少。

ELISA 自动化

ELISA 筛选不同种类细胞的混合物,确定何种细胞集落表达目标抗体。典型 ELISA 工作流包括多次清洗步骤,除去抗体孵育后未结合的抗体,随后与底物一起孵育进行显色反应。

由于 ELISA 方法步骤繁多,操作过程费时,不同试验间可能存在差异。采用全流程自动化,可消除用户出错的可能性,并提高生成数据的可靠性。

Biomek NXP 自动工作站可实现ELISA 自动化。通过集成 MultiWash™+ 微孔板洗板机、EMax® Plus 酶标仪及 Biomek NXP 工作站,可实现 ELISA 自动处理和分析。这种自动化解决方案在释放资源的同时提供更加可靠的 ELISA 结果。

基于孔板的流式细胞术

FACS 是一种特殊类型的流式细胞术。它基于每种生物细胞的光散射和荧光特性,采用高通量方法分选不同种类细胞的混合物,非常适用于初步筛选。但该方法要求单细胞悬液,样品制备便成了问题。基于孔板的自动化流式细胞术可克服该问题。此外,基于孔板检测可提供更高通量。

CytoFLEX 流式细胞仪是一款小型台式分析仪,集成入 Biomek i 系列自动化工作站,可实现全过程样品处理自动化,并具有数据采集功能。

Biomek i 系列工作站集成以下自动化功能:

  • 细胞铺板
  • 药物处理
  • 稀释
  • 胰蛋白酶消化
  • 重悬
  • 微孔板离心

对于高通量应用,研究人员可使用 SAMI EX 软件安排染色及分析工作流,以确保分析一致性。

初步筛选自动化的优势

使用高通量全自动化 ELISA FACS 设备进行初步筛选,可避免不同试验之间的差异,确保结果的可靠性。Biomek 工作站为 ELISA FACS 应用提供灵活的自动化解决方案:可配置台面布局、多种移液工具并集成其他设备(如酶标仪和洗板机),有助于确保快速、准确的初步筛选结果。

小结:

  • 初步筛选采取直接测量抗体-抗原结合的试验方法。
  • 初步筛选采取直接测量抗体-抗原结合的试验方法。
  • 可采用自动化模式,减少误差并提高生成数据的可靠性。
  • 基于孔板的 FACS 可实现快速、简便、自动化样品制备及筛选。

专题视频:Biomek i 系列实现 ELISA 自动化

请观看:ELISA 自动化的简化方法

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